在生物医学研究中，标本的采集与保存是进行ELISA测定的重要环节。可用作ELISA检测的标本种类繁多，包括体液（如血清）、分泌物（如唾液）以及排泄物（如尿液、粪便）等，以检测其中的抗体或抗原成分。部分标本可以直接用于测定（如血清、尿液），而另一些则需进行预处理（如粪便和某些分泌物）。在ELISA检测中，血清是最常用的标本。

血浆中除了含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其余成分与血清相似。制备血浆时需使用抗凝剂，而血清的获取则通过让血清自然凝固并收缩血块。除特殊情况外，医学检验中通常采用血清作为检测标本。在ELISA中，血浆和血清可以互相替代。采集血清时需遵循常规程序，避免溶血，因为红细胞的破裂会释放具有过氧化物酶活性的物质，这可能导致ELISA的非特异性显色。建议在新鲜状态下检测血清，并对可能的细菌污染保持警惕，因细菌内源性HRP也会产生假阳性反应。

对于标本的储存，通常在5天内可以将血清样本放置于4℃，若超过一周则需冷冻保存。冻存后需轻柔混合，以避免蛋白质的局部浓缩和分布不均，并应避免产生气泡。在处理混浊或有沉淀的血清标本时，可先通过离心或过滤得到澄清液。同时，反复冻融会降低抗体效价，因此在保存血清以备多次检测时，宜分装少量并冰存。自标本采集之初，即应遵循无菌操作，必要时可加入适量的防腐剂。

试剂准备

按照试剂盒说明书的要求准备实验所需的试剂。ELISA实验中所用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应保持新鲜且质量高。自配的缓冲液需使用pH计测量调整。取出冰箱中的试剂后，应等其温度恢复至室温再使用，不需在此次实验中使用的试剂部分应及时放回冰箱保存。

加样步骤

ELISA检测通常分为三次加样步骤：加标本、加酶结合物及加底物。加样时，应将液体加至ELISA板孔的底部，避免接触孔壁并注意不溅出和产生气泡。一般使用微量加样器进行加标，以确保每次加样更换吸嘴，防止交叉污染。若需要用稀释的血清，可提前在试管中按要求进行稀释，亦可在板孔中先加入稀释液，再加入血清样本，最后使用微型震荡器混匀1分钟。

温育过程

ELISA中包括两次抗原抗体反应，分别在加标本和加酶结合物后进行。抗原抗体反应需要适当的温度与时间来完成，这一过程称为温育。在固相免疫测定中，抗原与抗体的结合仅在固相表面上发生，因此需经过扩散达到反应的终点。一般的温育温度为37℃，这是实验室常用的温度，适合大多数抗原抗体的结合。相关实验表明，在37℃下，通常需要1到2小时以达到反应的顶峰。为加速反应，部分实验选择在43℃环境下进行，但不建议使用更高温度。尽管在4℃下能充分反应，因耗时较长，通常不在ELISA中采用。

在生物医学研究与临床检测领域，EVO视讯致力于提供优质的ELISA产品与服务，确保您在实验过程中的每个细节都完美无瑕，助力科研与医学进步。