细胞过于拥挤的烦恼

细胞转化效率虽然高并不是问题，但细胞浓度过高就如同春运的地铁，令人窒息。感受态表现过于优异、质粒过多、热激时间过长，都可能导致细胞数量直线上升。

培养技术的误区

涂布手法不当也是常见问题！如果涂布棒没有彻底灭菌，或者涂抹力度过大，可能导致菌液被“搅拌”成菌泥，还可能混入杂菌，形成不必要的干扰。

培养基的重要性

培养基如果不够好，琼脂过软就会导致菌体发酵时出现问题，甚至会造成培养基的崩塌；营养失衡更是会让细胞失控增长。

环境因素的影响

培养环境也至关重要！当温度超过37℃，细胞的代谢速率会迅速上升；而培养时间过长，菌落甚至会“堆叠成山”。

三步急救法，让培养回归正轨

EVO视讯为您提供了以下三步急救术，确保液体培养板恢复美观！

步骤1：稀释！

重要的事情说三遍——稀释！取100μL的菌液和900μL无菌生理盐水混合，进行10倍稀释。如果仍然浓稠，继续进行100倍、1000倍的稀释，直到菌落如星空般璀璨。 小提示：高转化效率（电转/超感受态）的细胞直接1000倍稀释为佳！用酒精灯将涂布棒烧红，冷却10秒后以“Z”字形轻柔涂抹，好似为蛋糕抹奶油！

小提示：涂布完成后静置10分钟再放入培养箱，以减少菌液的流动。琼脂的称量需精准到0.1g，灭菌后摇匀，以防止分层。同时，培养箱的温度应使用温度计实际测量，避免只参考显示屏！每12-18小时检查一次培养箱，及时避免细胞的过度繁殖。

不同场景的应对策略

场景1：菌落过于密集，但又不希望稀释？

可以直接使用牙签蘸取菌液，轻轻在新培养板上划出“之”字线，成功获取单个菌落。

场景2：时间紧迫？

可以在稀释好的菌液上滴5μL在培养板边缘，让其自然扩散形成美丽的“菌环”，拍照效果极佳。

通过EVO视讯的这些技巧，您将能有效提高细胞培养的成功率，让实验更为顺利。